何學軍,張妮婭,魏金濤,徐雪梅,齊德生(華中農業大學動物科技學院,武漢430070)作者簡介:何學軍,碩士研究生;齊德生,教授,通訊作者,主要從事飼料安全和畜禽環境衛生研究,Ｅ ｍａｉｌ:ｑｄｓ@ｍａｉｌ.ｈｚａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
摘要:選用180只8日齡艾維茵肉仔雞,研究3种飼料添加劑(大豆异黃酮、葡甘露聚糖和膨潤土)對飼喂霉變飼料的肉雞生長性能、免疫功能和骨骼的影響。結果表明,与正常飼料組相比,霉變飼料組顯著地降低了肉雞的采食量、日增重,增加了料肉比(Ｐ<0.05);但霉變飼料中添加大豆异黃酮,顯著地提高了肉雞采食量、日增重(Ｐ<0.05),降低了料肉比(Ｐ<0 05),提高了7周末血清中免疫球蛋白ＩｇＡ和ＩｇＧ的濃度。霉變飼料中添加葡甘露聚糖和膨潤土顯著提高肉雞日增重(Ｐ<0 05),對日采食量有提高的趨勢(Ｐ>0 05)。但膨潤土顯著降低了脛骨中鈣、磷的含量(Ｐ<0 05)。由此可見,3种添加劑對霉變飼料均有一定的脫毒作用,大豆异黃酮對霉變飼料的脫毒效果顯著优于葡甘露聚糖和膨潤土。
關鍵詞:霉菌毒素;添加劑;肉雞;生長性能;大豆异黃酮
据報道全世界約有25%的谷物受到霉菌毒素的污染,給養殖業和飼料業帶來嚴重的經濟損失。而目前對霉變飼料的處理主要是在飼料中添加各种吸附劑,常用的有天然鋁硅酸鹽類無机吸附劑(如膨潤土、沸石、蒙脫石、硅藻土、高岭土等)和酵母細胞提取物類有机吸附劑(如葡甘露聚糖)等。膨潤土是以蒙脫石為主要礦物的粘土岩,具有較大的比表面積、离子吸附能力和多孔性特點,對黃曲霉毒素有一定的選擇性吸附能力[1 2]。但膨潤土對其他霉菌毒素玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、單端孢類毒素等)吸附能力較差,還可能与飼料中微量元素、維生素及藥物
結合而降低營養物質的利用率;葡甘露聚糖對多种霉菌毒素具有吸附作用。酯化葡配甘露聚糖還可增進肉雞的采食量,減輕腹瀉症狀,而且与霉菌毒素結合后,霉菌毒素不易被解离[3],同時,對飼料中其他營養成分無顯著的負作用,所以,葡甘露聚糖是一种廣譜的,具有很大潛力的霉菌毒素吸附劑。最近研究表明,抗氧化物質(主要是維生素類)在動物体內能顯著地抑制霉菌毒素的毒性,提高動物的生長性能和免疫功能[4 5],而對其他抗氧化物質的研究較少。大豆异黃酮(ｓｏｙｂｅａｎｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ,ＳＩ)為多酚類物質,在体內外能与自由基生成相應的离子和分子,抑制自由基的產生,清除、熄滅自由基,終止自由基的連鎖反應,起到強有力的抗氧化作用[6 7]。同時,大豆异黃酮還能提高動物的免疫力[8],骨骼強度和骨骼中礦物元素的含量[9]。而將大豆异黃酮用于霉變飼料的脫毒研究還未見報道。本試驗利用發霉玉米部分替代正常玉米,并在此日糧中分別添加大豆异黃酮、膨潤土和葡甘露聚糖3种飼料添加劑,研究3种飼料添加劑對肉雞飼喂霉變飼料生長性能、免疫功能以及骨骼的影響,并比較不同脫毒劑的應用效果。
1 試驗材料与方法
1 1 材料
40%(質量分數)大豆异黃酮由華北制藥股份有限公司提供,其中大豆 (ｄａｉｄｚｉｎ)5 27%,黃豆 (ｇｌｙｃｉｔｉｎ)1 74%,染料木 (ｇｅｎｉｓｔｉｎ)5 91%,大豆黃酮(ｄａｉｄｚｅｉｎ)21 06%,黃豆黃素(ｇｌｙｃｉｔｅｉｎ)0.43%,染料木黃酮(ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ)6 9%(均為質量分數);葡甘露聚糖由華中農業大學食品科技學院提供,膨潤土由河南信陽上天梯丰源膨潤土有限公司提
供;霉變玉米于自然條件下(溫度22～32℃,濕度67%～92%)培養制備。
1.2 試驗設計及基礎日糧
1日齡商品代艾維茵肉仔雞,正常飼料育雛1周后,選取180只隨机分為4個處理組和2個對照組,每組5個重复,每個重复6只。具体分組如下對照1:無發霉玉米飼料組(陽性對照組);對照2:10%發霉玉米替代組(陰性對照組);處理1:對照2+100ｍｇ/ｋｇ大豆异黃酮(以大豆异黃酮計);處理2:對照2+200ｍｇ/ｋｇ大豆异黃酮(以大豆异黃酮計);處理3:對照2+0 05%(質量分數)葡甘露聚糖;處理4:對照2+0 05%(質量分數)膨潤土。
發霉玉米中黃曲霉毒素Ｂ1(ａｆｌａｔｏｘｉｎｓＢ1,ＡＦＢ1),玉米赤霉烯酮(ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ,ＺＥＮ)和嘔吐毒素(ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ,ＤＯＮ),含量分別為375、1250和2500μｇ/ｋｇ(分別按ＧＢ/8381-1987、ＧＢ/Ｔ19540—2004和ＧＢ/Ｔ8381 6—2005薄層色譜法測定,標准品均由Ｓｉｇｍａ公司提供)。相當于配合飼料中添加37 5μｇ/ｋｇＡＦＢ1、125μｇ/ｋｇＺＥＮ和250μｇ/ｋｇＤＯＮ。為防止在飼養過程中正常飼料發霉和霉變飼料繼續發霉,配料前將所有玉米中的含水率控制在12%以下,并于干燥、陰涼條件下存放。基礎日糧配制見表1。
1.3 飼養管理
試驗雞于地面分籠平養,每籠6只。試驗前將雞舍、雞籠進行徹底清掃、消毒,于第7和14日齡接种新城疫Ⅳ苗,11日齡接种法氏囊疫苗。整個試驗期為7周,分2階段進行。第1周所有雞飼喂正常飼料進行育雛處理,第2周正式開始試驗,飼喂相應的飼糧。整個試驗期內,雞自由采食和飲水。
1.4 測定指標及方法
1)生長性能。于試驗當天、第4和7周末清晨空腹稱重,以重复為單位記錄2階段体增重和耗料量,計算各期平均日增重、平均日采食量和料肉比。
2)骨骼指標的測定。于試驗第4和7周末清晨空腹稱重后,每重复隨机選取2只雞,頸靜脈放血致死;分离左側脛骨,稱重,并計算脛骨相對重量;脛骨稱重后,任選一個脛骨樣密封袋保存待測。脛骨于(65±2)℃條件下烘至恒重,粉碎,測定鈣、磷、鐵、銅和鋅的含量。鈣:ＥＤＴＡ法;磷:《釩鉬酸銨顯色法》(ＧＢ/Ｔ6437—92);鐵、銅和鋅:原子吸收分光光度法。
3)免疫功能指標的測定。于試驗第4和7周末,每重复隨机選取2只雞,頸靜脈放血致死;分离脾臟、胸腺和法氏囊,稱重,并計算相對重量;每重复選取1只雞采集血液,分离血清,-20℃保存用以測定ＩｇＡ、ＩｇＭ和ＩｇＧ含量。ＩｇＡ、ＩｇＭ和ＩｇＧ均采用免疫透射比濁法進行測定,具体操作按說明書進行,試劑盒由浙江伊利康生物技術有限公司提供。
1.5 數据處理
各組數据采用ＳＡＳ統計軟件進行單因素方差分析,用Ｄｕｎｃａｎ氏進行多重比較,以Ｐ<0 05為顯著水平,試驗數值以平均數±標准差(Ｍ±ＳＤ)表示。
2 結果与分析
2.1 對肉雞生長性能的影響
不同處理組對肉雞2～4和5～7周平均日增重(ＡＤＧ)、平均日采食量(ＡＤＦＩ)和料肉比(Ｆ/Ｇ)的影響見表2。從表2可知,与正常飼料組(對照1)相比,霉變飼料顯著地降低了肉雞兩期的日增重和采食量(Ｐ<0 05),同時提高了料肉比(Ｐ<0 05)。而大豆异黃酮、葡甘露聚糖和膨潤土均能改善霉菌毒素對肉雞生長性能的影響。
1)平均日增重。從表2可以看出,霉變飼料中添加大豆异黃酮、葡甘露聚糖或膨潤土后各處理組肉雞的平均日增重均高于對照2。2～4周處理1和2肉雞日增重与對照2組相比差异顯著(Ｐ<0 05),比對照2日增重分別提高了15 10%和18 09%,而与對照1組無顯著差异(Ｐ>0 05)。處理3和4平均日增重高于對照2,但差异不顯著(Ｐ>0 05)。5～7周,處理1、2和3組肉雞日增重顯著高于對照2(Ｐ<0 05),分別比對照2提高了12 16%、13 09%、10 01%;處理4高于對照2,但差异不顯著(Ｐ>0 05),其中處理2效果最好。
2)平均日采食量。霉變飼料中添加3种飼料添加劑后平均日采食量均高于對照2。2～4周處理1和2肉雞平均日采食量与對照2相比差异顯著(Ｐ<0 05),比對照2分別提高了12 74%和16 26%,處理3和4均比對照2有提高的趨勢(Ｐ>0 05);處理1和2与對照1沒有顯著的差异(Ｐ>0 05)。5～7周處理1和2肉雞平均日采食量顯
著高于對照2(Ｐ<0.05),分別比對照2提高了7.78%和8.34%,處理3和4均比處理2有提高的趨勢(Ｐ>0.05)。但處理3和4在兩期的日增重均顯著低于對照1(Ｐ<0.05),以處理2平均日采食量最大。
3)料肉比。霉變飼料中添加3种飼料添加劑后均降低了料肉比。2～4周處理1和2料肉比顯著低于對照2(Ｐ<0.05)。而且与對照1無顯著的差异(Ｐ>0.05).處理3和4比對照2料肉比有所提高,但差异不顯著(P>0.05)。5～7周各個處理組料肉比与對照2相比均沒有顯著性差异(Ｐ>0.05)。整個飼養周期各個處理組料肉比均低于對照2,但只有處理1和2有顯著性差异(Ｐ<0 05)。
2. 2 對肉雞脛骨的影響
1)對脛骨絕對質量和相對質量的影響。由表3可知,4周末時,處理4脛骨率最低,并与其他處理差异顯著(Ｐ<0 05),處理2最高,但与對照1、2和處理1及3差异不顯著(Ｐ>0 05)。7周末時,處理1、2和3脛骨率均顯著高于處理4(Ｐ<0 05)、比對照1和2也有所提高(Ｐ>0 05),其中以處理4最低,但与對照1和2差异不顯著(Ｐ>0 05)。2)對脛骨中礦物元素的影響。由表4可知4周末各處理脛骨中鐵和銅含量差异不顯著(Ｐ>0 05),處理4脛骨中鈣和磷均顯著低于對照1及處理1和2(Ｐ<0 05),處理3与各組均無顯著差异,以處理2最高;脛骨鋅以處理1和2最高,顯著高于處理4(Ｐ<0 05),但与其他處理無顯著差异。由表4可知,7周末時各處理脛骨中鐵和銅含量差异不顯著(Ｐ>0 05),處理4脛骨中鈣、磷和鋅均為最低,而且与處理1均差异顯著(Ｐ<0 05),處理3中鈣、磷和鋅均低于處理1和2,但差异不顯著(Ｐ>0
05)。表明,處理1脛骨中礦物元素含量最高,与處理2無顯著差异。而處理4最低,表明膨潤土的添加可能對脛骨發育有一定的影響。
2 3 對免疫功能的影響
1)對免疫器官的影響。由表5可知,各處理法氏囊率和脾臟率,以及4周末胸腺率均無顯著差异(Ｐ>0 05),而7周末處理3胸腺率顯著高于對照和其他處理(Ｐ<0 05)。表明,3种飼料添加劑對肉雞的免疫器官影響不顯著。
2)對免疫免疫球蛋白的影響。表5結果表明,4周末各對照組和各處理組血清中ＩｇＭ和ＩｇＧ均無顯著差异(Ｐ>0 05),而處理2和3血清中ＩｇＡ顯著高于對照2(Ｐ<0 05),且与對照1無顯著差异;處理1和4高于對照2,但差异不顯著(Ｐ>0 05)。7周末時,各組血清中ＩｇＭ均無顯著差异(Ｐ>0 05),處理1、2和3血清中ＩｇＡ和ＩｇＧ顯著高于對照2(Ｐ<0 05),處理4也高于對照2(Ｐ>0 05)。表明,3种飼料添加劑均對肉雞血清中ＩｇＡ和ＩｇＧ有所提高。
3 討 論
霉菌毒素對動物的影響首先表現在對生長性能的影響。本試驗結果表明,霉菌毒素顯著降低了肉雞的采食量、日增重和飼料轉化率(Ｐ<0 05)。同時對血清中免疫球蛋白也有一定的影響。3种飼料添加劑對飼喂霉變飼料肉雞的生長性能均有一定的改善作用,其中以大豆异黃酮的添加效果最好,同時對血清中免疫球蛋白質量濃度有改善作用,提高了脛骨中礦物元素的含量。
1)膨潤土對霉菌毒素有一定的選擇性吸附能力。本試驗以自然污染的霉變飼料為材料,并在肉雞霉變飼料中添加0 05%的膨潤土顯著地提高了肉雞的日增重和日采食量(Ｐ<0 05),但顯著低于正常飼料組和大豆异黃酮添加組(Ｐ<0 05),這可能是霉變飼料中添加膨潤土后,在胃腸道中吸附了部分黃曲霉毒素,在体內的吸附与解吸的過程中,使得部分黃曲霉毒素結构被破坏,失去原有活性,另一部分被膨潤土吸附后未被解吸的黃曲霉毒素則隨糞便排出体外。膨潤土的添加顯著地降低了脛骨的質量和脛骨中鈣、磷含量(Ｐ<0 05),而對免疫功能無顯著的影響。這可能是因為膨潤土對礦物元素有一定的吸附作用,飼料中添加膨潤土時會干扰動物消化道對礦物元素的吸收,從而降低礦物元素的吸收利用率。而膨潤土對蛋氨酸、賴氨酸和維生素Ｂ2也有一定的吸附作用[10],降低氨基酸和維生素的吸收和
利用率。這可能是其效果不佳的原因之一。其次,膨潤土對霉菌毒素的吸附具有選擇性,對黃曲霉毒素有較好的吸附作用,而對Ｔ 2毒素及玉米赤霉烯酮沒有明顯的吸附效果,不能減輕Ｔ 2毒素對肉仔雞的毒性,也不能減輕家禽日糧中自然感染的低劑量的复合霉菌毒素的有害作用[11]。
2)于肉雞霉變飼料中添加0 05%的葡甘露聚糖顯著地提高了肉雞的日增重和日采食量(Ｐ<0.05),但低于正常飼料組和大豆异黃酮添加組。葡甘露聚糖分子具有較大的表面區域,其表面富含不同孔徑的孔穴,對霉菌毒素有很好的吸附效果[12],因而能對抗霉菌毒素對動物的影響。試驗表明葡甘露聚糖對黃曲霉毒素有較好的吸附作用[13],對玉米赤霉烯酮、Ｔ 2毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇以及赭曲霉毒素Ａ也有一定的吸附作用,但吸附較低[14]。葡甘露聚糖吸附劑對飼料進行脫毒處理時不產生其他有毒物質,也不影響飼料的營養价值、氨基酸及微量
元素的利用率以及飼料的适口性[15]。這与本試驗的結果相一致。但是由于葡甘露聚糖在吸附霉菌毒素形成霉菌毒素 聚糖复合物的同時,可能存在著被腸道微生物或其分泌的 類降解,從而使被吸附的霉菌毒素又被釋放出來,繼續在動物胃腸道中被吸收,造成机体的損傷,這可能是脫毒效果較大豆异黃酮效果差的原因之一。
3)大豆异黃酮是异黃酮類植物雌激素中的一种,它是天然的有效活性成分,具有雌激素和抗雌激素樣作用、抗氧化作用、提高机体免疫力及對內分泌系統影響等多种生物學功能。楊曉靜等[16]在鵪鶉日糧中分別添加5ｍｇ/ｋｇ人工合成的大豆黃酮和20ｍｇ/ｋｇ從大豆中提取的大豆黃酮,結果鵪鶉日增重顯著提高,料重比有降低的趨勢。本試驗于肉雞霉變飼料中添加100和200ｍｇ/ｋｇ的大豆异黃酮,結果顯著地提高了肉雞的日增重和飼料采食量(Ｐ<0. 05)。可能与其抗氧化性和對動物免疫功能的影響所致。大豆异黃酮顯著降低卵巢切除(ＯＶＸ)兔內
皮素 1(ＥＴ 1)、腫瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)、白細胞介素 6(ＩＬ 6)水平[9];提高鵪鶉法氏囊指數及新城疫抗体滴度[16]。本研究也表明,大豆异黃酮能提高了7周末血清中ＩｇＡ和ＩｇＧ的濃度(Ｐ<0 05)。体外研究表明,日糧中添加抗氧化劑:β 胡蘿卜素、抗坏血酸、硒、維生素Ｅ等能有效地降低ＡＦＢ1導致大鼠肝癌的作用[17];β 胡蘿卜素和斑蝥黃能抑制ＡＦＢ1對肉雞生長的影響[18];維生素Ｃ能降低ＡＦＢ1對豚鼠的影響[19];維生素類不僅對黃曲霉毒素的毒性有抑制作用,對其他常見的毒素也有顯著的效果。其可能的机制是這些抗氧化物質,作為自由基清除劑,保護生物膜免遭霉菌毒素的損害。有研究表明大豆异黃酮能使小鼠全血、肝臟中的ＣＡＴ、ＧＳＨ Ｐｘ以及肝臟中ＳＯＤ活性均顯著升高[7];大豆黃酮使老齡蛋雞血清超氧化物歧化 水平顯著升高[6],血清、肝臟和下丘腦組織中丙二醛水平顯著降低。大豆异黃酮提高机体抗氧化能力,從而降低霉菌毒素對肉雞的氧化損傷,可能是其改善肉雞生長性能的机制所在。
4 結 論
膨潤土對飼喂霉變飼料的肉雞日增重有改善作用,但顯著降低了脛骨中鈣、磷含量,這表明,膨潤土對霉菌毒素有一定吸附作用,但無選擇性。葡甘露聚糖的添加顯著提高了飼喂霉變飼料的肉雞日增重,而對脛骨發育無不良影響。大豆异黃酮的添加顯著地降低了霉菌毒素對肉雞日增重、采食量和料肉比的影響,其中前期添加效果比后期更顯著,同時提高了血清中ＩｇＡ和ＩｇＧ的質量濃度。
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